Unidad de Citometría

• Análisis multiparamétrico complejo: Mediante la combinación de fluorocromos compatibles con las líneas de láser y filtros o utilización de metales pesados, es posible realizar un inmunofenotipaje. El inmunofenotipaje se refiere a la utilización de herramientas inmunológicas, como anticuerpos acoplados a marcadores para la detección específica de antígenos localizados tanto en el interior como en la superficie de la célula. Permite identificar, enumerar y caracterizar cualquier célula individual o subcomponente celular. Con aplicaciones tan importantes como la identificación de enfermedades hematológicas, desordenes hematológicos, trasplantes, diagnóstico de enfermedades infecciosas, detección de la hemorragia fetomaterna, test de alergia basados en la en la activación de basófilos, activación plaquetaria, diagnóstico y monitorización de enfermedades autoinmunes, identificación y cuantificación de autoanticuerpos, identificación de fenotipos multiresistentes a las drogas en cáncer, cuantificación proteínas solubles, etc.
• Detección de genes reporteros: Una de las técnicas más importantes para el estudio de expresión de un gen de interés es la fusión de genes reporteros o informadores, que permiten una determinación rápida y fácil de la actividad de un promotor. En citometría se utiliza mucho GFP como gen reportero.
• Estudio de procesos de muerte celular: Puede diferenciarse si la célula está en una fase temprana o tardía de la apoptosis, o si por el contrario la muerte ha ocurrido por necrosis. Para ello se cuantifica la cantidad de Annexina-V unida a la fofatidilserina de la superficie de las células apoptóticas, o la internalización de Ioduro de Propidio (IP) o 7-aminoactinomycin (7-AAD), debido a la formación de poros en la membrana celular, típicos de las células necróticas.
• Ciclo Celular y proliferación celular: En los estudios del ciclo celular pueden diferenciarse las distintas fases de división de una célula, en función de la cantidad de ADN, lo que nos permite calcular índices o ratios entre picos. Las fases que se diferencian en citometría son G0/G1, que corresponde a fase quiescente y de preparación para división con una cantidad de ADN 2n. Fase S, es la parte del ciclo con síntesis de ADN, por lo tanto el marcaje aumenta. Y la fase G2/M, donde aumenta la proporción de ADN el doble (4n). Los marcajes utilizados suelen ser IP, AmCyan, 7-AAD y BrdU, para citometría de flujo y IdU, pRB (Ser807/811), Cyclin B1, Ki67; pHistone H3 (Ser28), para citometría de masas.
• Ensayos funcionales. Mediante citometría pueden cuantificarse aquellas propiedades dinámicas de las células que pueden modificarse rápidamente gracias a sensores fluorescentes, cuyas propiedades ópticas o de distribución cambian en respuesta al fenómeno de interés. Algunos ejemplos son detección de ROS, o la medida ratiométrica de Fluo/Indo para estudiar el flujo de calcio.

Fabricante: BD Biosciences
Características técnicas: Dispone de un láser azul Coherent® Sapphire™ de estado sólido refrigerado por aire (488 nm y 20 mW de potencia), que permite detectar cuatro colores. Un laser rojo JDS Uniphase™ HeNe (633 nm y 17 mW), para dos colores. El número total de detectores es de 8 (6 detectores de fluorescencias y dos de parámetros morfológicos). El software para adquirir muestras y analizar es FACSDiva. El sistema posee un módulo de calidad que permite optimizar voltajes y realizar un control y seguimiento del funcionamiento del sistema.

Fabricante: BD Biosciences
Características técnicas: BD FACSVerse™ es un citómetro de uso en investigación, dispone de tres líneas láser, 488 nm (azul) para 4 colores; 633 nm (rojo) para dos colores y violeta (407 nm) para dos colores. Puede detectar hasta 10 parámetros de dispersión (8 detectores de fluorescencias y dos de parámetros morfológicos). Presenta un sistema de laser que minimiza las pérdidas de luz y maximiza la resolución para aplicaciones multiparamétricas. Los láseres se caracterizan por presentar un micromotor para alineamiento automático. BD FACSVerse™, además de presentar las velocidades de adquisición estándar (alta, media y baja), presenta un modo de alta sensibilidad que hace más sencillo detectar partículas con marcaje débil. Su sistema fluídico permite adquirir muestras de forma manual en cualquier formato de tubo. Posee un cargador de muestras que permite analizar desde 30 a 40 tubos en una sola tanda, hasta placas de 96 y 384 pocillos. Dispone de medidor volumétrico. El software para adquirir muestras y analizar es FACSSuite. El sistema posee un módulo de calidad que optimiza voltajes y realiza un control y seguimiento del funcionamiento del equipo, lo que proporciona una gran reproducibilidad de los experimentos.

Fabricante: BD Bioscencies
Características técnicas: Dispone de tres líneas láser: El diodo Coherent® Sapphire™ de estado sólido azul (488 nm y 13 mW de potencia), permite detectar cinco colores; láser rojo (633 nm y 11 mW JDS Uniphase™ HeNe refrigerado por aire), para dos colores y el laser violeta en estado sólido (407 nm y 10 mW) para dos colores. En total, puede detectar hasta 11 parámetros de dispersión al mismo tiempo (9 detectores de fluorescencias, Forward scatter (FSC) y Side scatter (SSC)), así como purificar diferentes tipos de poblaciones celulares en base a características determinadas. La velocidad de adquisición puede llegar hasta 70000 eventos por segundo. Admite diferentes soportes tanto para la adquisición como para la separación de muestras. Está equipado con una unidad ACDU (Automated Cell Deposition Unit) para la separación en placas multipocillos o en portaobjetos. Dispone también de un sistema de refrigeración que permite la adquisición y separación de muestras con control de la temperatura. Utiliza el software FACSDiva para la adquisición y análisis de muestras.

Fabricante: BD Bioscencies
Características técnicas: Dispone de cuatro líneas láser: El diodo Coherent® Sapphire™ de estado sólido azul (488 nm y >50 mW de potencia), permite detectar dos colores; láser rojo (640 nm y 100 mW JDS Uniphase™ HeNe refrigerado por aire) para dos colores, láser verde (561 nm y >50 mW) para cinco colores y el laser violeta en estado sólido (405 nm y 85 mW) para seis colores. En total, puede detectar hasta 18 parámetros de dispersión al mismo tiempo (16 detectores de fluorescencias, Forward scatter (FSC) y Side scatter (SSC)), así como purificar diferentes tipos de poblaciones celulares en base a características determinadas. La velocidad de adquisición puede llegar hasta 70000 eventos por segundo. Admite diferentes soportes tanto para la adquisición como para la separación de muestras. Está equipado con una unidad ACDU (Automated Cell Deposition Unit) para la separación en placas multipocillos o en portaobjetos. El equipo está integrado una cabina de Seguridad biológica tipo II y además, dispone de un sistema AMU de aspiración de aerosoles. La muestra puede estar refrigerada durante la adquisición y separación. Utiliza el software FACSDiva 8.0 para la adquisición y análisis de muestras.